摘要： 抗体药物偶联物（ADC）是当前肿瘤治疗领域最热门的方向之一。生物素-亲和素/链霉亲和素系统（BAS）在ADC研发的多个关键环节中发挥着不可替代的作用。本文梳理BAS在ADC开发中的具体应用，供药物研发人员参考。

一、ADC药物简介

抗体药物偶联物（Antibody-Drug Conjugate，ADC）由三部分组成：

• 抗体（Antibody）： 靶向识别肿瘤抗原（如HER2、TROP2、HER3等）

• 连接子（Linker）： 连接抗体与毒素，可设计为可裂解型或不可裂解型

• 毒素（Payload）： 细胞毒性小分子（如MMAE、DM1、SN-38等）

ADC研发中，DAR值（药物抗体比，Drug-to-Antibody Ratio） 的精确控制、抗原靶点的验证、毒素释放机制研究，都需要高灵敏度的检测工具。

二、BAS在ADC研发各阶段的应用

2.1 靶点验证阶段

目标： 确认候选靶点在肿瘤细胞表面的表达量与特异性

BAS应用：

• 用生物素化抗体配合SA-荧光素进行流式细胞检测

• 靶抗原表达量（受体密度）直接影响ADC内吞效率

优势： 生物素化一步法修饰抗体，无需更换检测平台，灵敏度是传统FITC直标的3~5倍。

2.2 DAR值控制与表征

目标： 精确测量每个抗体分子偶联的毒素平均数量

BAS应用：

• 若毒素带有生物素报告基团，可用HABA法快速评估标记效率

• SA-HRP/SA-AP ELISA用于ADC产品的质量控制

关键参数：

2.3 内化（Internalization）研究

目标： 研究ADC与靶细胞结合后的内吞速率和胞内转运路径

BAS应用：

1. 将生物素化ADC与靶细胞孵育

2. 不同时间点用SA-荧光素检测细胞表面残余ADC

3. 溶酶体共定位实验评估ADC到达溶酶体的时间

4. 荧光显微镜/流式追踪内化动力学

2.4 毒素释放与旁观者效应研究

目标： 确认毒素在靶细胞内的释放量及向周围细胞的扩散程度

BAS应用：

• 设计生物素标记的模拟linker底物，研究溶酶体蛋白酶（如cathepsin B）的裂解效率

• SA磁珠Pull-down结合质谱，定量检测游离毒素

2.5 免疫组化（IHC）与靶点病理评估

目标： 在患者肿瘤组织切片中确认靶点表达，指导用药

BAS应用：

• 生物素化一抗 + SA-HRP + DAB显色

• 灵敏度远高于直接标记，适合低表达靶点检测

三、专为ADC研发设计的生物素化试剂推荐

四、凯康镁科技ADC研发支持服务

纳孚生物可为ADC研发提供：

• 生物素化linker-payload模拟底物： 定制合成，保留毒素类似结构

• 生物素化抗体片段（Fab/scFv）： 定点标记，保留结合活性

• 光交联ADC探针： 结合双吖丙啶，用于共价靶点鉴定

• 稳定同位素标记标准品： ²H/¹³C/¹⁵N标记，用于PK/ADME研究